上海原鑫生物科技從事科研試劑的優(yōu)質(zhì)企業(yè)。該文章詳細的介紹了人白細胞介素6elisa試劑盒的檢測步驟、結(jié)果判定、參數(shù)和常見問題及解決辦法這四個方面。本文僅供于科研研究，不得用于臨床試驗！ 九、檢測步驟 1 按照實驗設(shè)計，在標準品與樣本孔中加樣100ul，空白對照不加 2 25℃避光孵育2h 3 棄去液體，用洗滌液清洗4次，每次每孔至少加洗滌液300ul，洗完后吸水紙上拍干 4 加入酶標抗體溶液100ul，空白對照不加，25℃避光孵育1h 5 同步驟3 6 每孔加入底物A、B各50ul，25℃避光孵育20min，顯色淺可適當延長孵育時間 7 加入終止液50ul，10min內(nèi)在450nm波長處測OD值
十、結(jié)果判斷 1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值。 2.計算標準品、樣品的平均 OD 值：每個標準品和標本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值 3.以標準品濃度為橫坐標，吸光度OD值為縱坐標，用軟件繪制標準曲線，樣品中IL-6含量可通過對應(yīng)OD 值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。 4. 若標本 OD 值高于標準曲線上限，應(yīng)做適當稀釋后重新檢測，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。
十一、參數(shù)表征 1.數(shù)據(jù)及標準曲線
| Concentration(pg/ml) | OD1 | OD2 | 空白 | 0 | 0 | 0 | S1 | 5.47 | 0.153 | 0.135 | S2 | 10.94 | 0.204 | 0.211 | S3 | 21.88 | 0.296 | 0.301 | S4 | 43.75 | 0.462 | 0.485 | S5 | 87.5 | 0.787 | 0.775 | S6 | 175 | 1.358 | 1.350 | S7 | 350 | 2.153 | 2.172 |
2. 準確度：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R>0.95 1. 檢測范圍：5.47-350pg/ml(如超出檢測范圍，需將樣本稀釋后檢測) 2. 靈敏度：≤5.47pg/ml 4 特異性：不與其他可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng) 5 重復(fù)性：變異系數(shù)≤15% 6 儲存條件：2-8℃冷藏 7 有效期：6個月
十二、常見問題及解決辦法
問題 | 可能原因 | 解決方法 | 高背景或陰性 | 洗板不充分 | 將洗滌液注入反應(yīng)孔充分洗滌，徹底拍干孔中液體 | 酶結(jié)合物過量 | 檢查酶稀釋度，按說明書標識的稀釋度稀釋 | 底物污染 | 加底物前檢查底物是否為透明無色，請勿用變藍的底物，重新用新的底物試驗 | 陰性對照孔被陽性對照污染 | 注意洗滌時不要把洗液溢出孔外，不使陰陽對照孔液體漣接一起 | 不同批次試劑混用 | 檢查試劑批號，請勿用不同批次試劑 | 顯色信號弱 | 試劑過期 | 檢查試劑盒有效期，請勿用過期試劑 | 孵育時間過短 | 按說明書中規(guī)定的時間孵育 | 試劑污染 | 檢查試劑是否污染，請勿用污染的試劑 | 酶標儀濾光片不匹配 | 檢查酶標儀設(shè)置及濾光片是否匹配 | 試劑盒平衡不充分 | 確保試劑盒試驗前平衡至室溫 | 顯色時間不夠 | 增加底物顯色時間 | 無顯色信號 | 檢測抗體、酶、或顯色劑漏加 | 檢查試驗操作流程，重復(fù)試驗 | 酶被疊氮鈉污染 | 請使用重新配制的試劑 | 試劑添加順序有誤 | 檢查復(fù)核試驗添加順序、流程，重復(fù)試驗 | 標曲佳但樣品孔無信號 | 樣品中靶標物含量低或樣品中無靶標物 | 設(shè)置陽性對照，重復(fù)實驗 | 樣品基質(zhì)效應(yīng)影響檢測 | 重新稀釋樣品后復(fù)測 | 標曲佳但樣品信號偏高 | 樣品中待檢物含量超過標準曲線范圍 | 重新稀釋樣品后復(fù)測 | 邊緣效應(yīng) | 孵育溫度不均衡 | 孵育時每步均使用新的封板膠紙，避免在環(huán)境溫度變化大的地方孵育，勿疊放反應(yīng)板 |
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