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人狂犬病毒抗原ELISA試劑盒的使用方法如下：

1. 試劑準(zhǔn)備：

• 將所有試劑和樣本緩慢平衡至室溫（18-25℃），避免直接在37℃下溶解。

• 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，室溫靜置約10分鐘，反復(fù)顛倒以助溶解。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，依次倍比稀釋成不同的梯度。

• 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

2. 操作步驟：

• 樣品準(zhǔn)備：將待測樣本按照說明書要求進(jìn)行稀釋，并加入到相應(yīng)的反應(yīng)孔中。

• 包被板處理：將預(yù)包被狂犬病毒抗原的微孔板取出，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。

• 加入生物素標(biāo)記物：向每個(gè)反應(yīng)孔中加入適量的生物素標(biāo)記的單克隆抗體，4℃過夜孵育。

• 洗滌：次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。

• 加入HRP酶聯(lián)物：向每個(gè)反應(yīng)孔中加入HRP標(biāo)記的酶聯(lián)物，室溫孵育30分鐘。

• 再次洗滌：用洗滌緩沖液洗3次。

• 加入底物液：向每個(gè)反應(yīng)孔中加入底物液A和底物液B，避光反應(yīng)10-15分鐘。

• 。

• 讀數(shù)：在酶標(biāo)儀上于450nm波長下測定吸光度（OD值），記錄數(shù)據(jù)。

3. 結(jié)果計(jì)算：

• 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中狂犬病毒糖蛋白的濃度。

• 陰性判斷、弱陽性判斷和陽性判斷均需參考試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線和Cut-off值。

4. 注意事項(xiàng)：

• 試劑盒需在4℃保存，開封后應(yīng)在10天內(nèi)使用完畢。

• 使用新鮮樣本或-20℃保存樣本以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

• 操作過程中需避免交叉污染，確保每一步的精確性。

注：原鑫生物這款人狂犬病毒抗原ELISA試劑盒基于競爭法原理，通過狂犬病毒糖蛋白與生物素標(biāo)記的單克隆抗體的特異性反應(yīng)，定量檢測狂犬病毒滅活樣本中的病毒糖蛋白成分，適用于科研領(lǐng)域。