人睪酮(T)ELISA試劑盒使用方法
上海原鑫生物科技有限公司生產(chǎn)的，人睪酮(T)ELISA試劑盒是一種用于定量測定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中睪酮含量的重要工具。該試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）原理， 通過特定的抗體抗原反應(yīng)及酶促顯色反應(yīng)，實現(xiàn)對睪酮濃度的精確測量。以下是詳細(xì)的使用方法步驟，旨在幫助用戶準(zhǔn)確、高效地完成檢測過程。
一、試劑盒組成及保存
本試劑盒通常包含以下主要組件： 96孔板（預(yù)包被）：用于固定抗原，進(jìn)行免疫反應(yīng)。 標(biāo)準(zhǔn)品：一系列已知濃度的睪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 檢測溶液A和B：分別為酶結(jié)合物和顯色底物，參與免疫反應(yīng)及顯色反應(yīng)。 TMB底物：辣根過氧化物酶（HRP）的底物，用于顯色。 終止液：用于終止顯色反應(yīng)，使顏色穩(wěn)定。 濃洗滌液：用于洗滌去除未結(jié)合的成分。 使用說明書：提供詳細(xì)的操作步驟和注意事項。
試劑盒應(yīng)存放在推薦的溫度條件下，未開封的試劑盒可在4℃保存一周，長期保存應(yīng)置于20℃。使用后的剩余試劑應(yīng)按標(biāo)簽所示溫度繼續(xù)保存，開封后的酶標(biāo)板需加干燥劑后密封保存于20℃，避免潮濕。
二、樣本采集與處理
1. 血清：室溫下血液自然凝固1020分鐘后，以20003000轉(zhuǎn)/分的速度離心20分鐘左右，收集上清液。若需長期保存，可置于20℃或80℃，但需避免反復(fù)凍融。 2. 血漿：根據(jù)標(biāo)本要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合1020分鐘后，同樣以20003000轉(zhuǎn)/分的速度離心20分鐘，收集上清液。 3. 其他生物液體（如尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、胸腹水、腦脊液等）：根據(jù)具體要求進(jìn)行收集和處理，一般需離心去除雜質(zhì)后取上清液進(jìn)行檢測。
三、操作步驟
1. 試劑準(zhǔn)備：將試劑盒內(nèi)各試劑置于室溫（1825℃）平衡30分鐘。濃洗滌液按1:20的比例用蒸餾水稀釋備用。標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水溶解至指定濃度。
2. 加樣：在酶標(biāo)板上設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔。標(biāo)準(zhǔn)品孔加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液各50μL；樣本孔先加入40μL樣品稀釋液，再加入10μL待測樣本，使樣本終稀釋度為5倍。注意避免觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后，置于37℃恒溫箱中溫育60分鐘，使抗原與抗體充分反應(yīng)。
4. 洗滌：揭掉封板膜，棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干殘留液體。
5. 顯色：每孔依次加入顯色劑A和B各50μL，輕輕震蕩混勻，置于37℃避光顯色15分鐘。
6. 終止：每孔加入50μL終止液，終止顯色反應(yīng)，此時藍(lán)色立即轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。
7. 測定：使用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘內(nèi)完成，以空白孔調(diào)零。
四、數(shù)據(jù)處理
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?？刹捎镁€性回歸法或雙對數(shù)坐標(biāo)法繪制平滑曲線。 2. 樣品濃度計算：根據(jù)樣品的OD值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找對應(yīng)的濃度值，再乘以稀釋倍數(shù)（本例中為5倍），即為樣品的實際濃度。
五、注意事項
1. 操作環(huán)境：實驗室應(yīng)保持整潔、干燥，避免灰塵和污染物。實驗室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件應(yīng)盡量保持一致。 2. 試劑使用：不同批號的試劑不可混用，避免交叉污染。加樣時應(yīng)使用一次性吸頭，避免重復(fù)使用。 3. 結(jié)果判斷：結(jié)果判斷應(yīng)在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。 4. 樣本保存：樣本采集后應(yīng)盡快處理，避免長時間放置導(dǎo)致降解。如需保存，應(yīng)置于推薦的溫度條件下，并避免反復(fù)凍融。
通過以上步驟，用戶可以準(zhǔn)確、高效地利用人睪酮(T)ELISA試劑盒完成睪酮
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