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γ-谷氨酰半胱氨酸銜接酶（GCL） 品牌：原鑫生物 類(lèi)別：代測(cè)服務(wù) - LC-MS檢測(cè)|液相串聯(lián)質(zhì)譜 規(guī)格：暫無(wú)   預(yù)約待測(cè)

    γ-谷氨酰半胱氨酸銜接酶（GCL）

    測(cè)定意義：

    GCL是GSH合成的限速酶，GSH對(duì)GCL有反應(yīng)抑止作用。GCL基因表達(dá)受多種要素調(diào)理，如氧化劑、抗氧化劑、生長(zhǎng)因子和炎癥因子等。GCL活性上下對(duì)GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影響。

    測(cè)定原理：

    在ATP和Mg2+存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同時(shí)ATP去磷酸化產(chǎn)生無(wú)機(jī)磷分子，經(jīng)過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷增加速率，即可計(jì)算出GCL活性。

    GCL測(cè)定操作

    1.分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)理波長(zhǎng)到660nm，蒸餾水調(diào)零。

    2.2.空白管：取1.5mLEp管，依次參加試劑一240μL、試劑二260μL、試劑三60μL和蒸餾水120μL，混勻后蓋緊，37℃水浴精確反響15min；再參加試劑四300μL，混勻后，25℃、8000g，離心10min，取上清500μL，參加試劑五500μL，混勻后蓋緊，45℃水浴10min，冷卻后測(cè)定660nm處吸光值，記為A空白管。

    3.3.測(cè)定管：取1.5mLEp管，依次參加試劑一240μL、試劑二260μL、試劑三60μL和上清液120μL，混勻后蓋緊，37℃水浴精確反響15min；再參加試劑四300μL，混勻后，25℃、8000g，離心10min，取上清500μL，參加試劑五500μL，混勻后蓋緊，45℃水浴10min，冷卻后測(cè)定660nm處吸光值，記為A測(cè)定管。